漢坦病毒檢測(cè)試劑盒
漢坦病毒檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
腎綜合征出血熱（以下簡(jiǎn)稱出血熱）是由漢坦病毒引起的一種自然疫源性疾病，是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病。
我國(guó)每年腎綜合征出血熱發(fā)病人數(shù)占世界報(bào)道的漢坦病毒感染病例的90%以上，是受漢坦病毒危害最為嚴(yán)重的國(guó)家。我國(guó)大陸的31個(gè)省、市、自治區(qū)均有病例發(fā)生。我國(guó)年發(fā)病數(shù)最高曾超過(guò)11萬(wàn)，近十年來(lái)我國(guó)年報(bào)告發(fā)病人數(shù)一直在2～5萬(wàn)左右，新疫區(qū)不斷出現(xiàn)，并時(shí)有暴發(fā)流行，老疫區(qū)的類型也有所變化。
因此，開(kāi)展腎綜合征出血熱的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)具有十分重要的意義，德國(guó)IBL公司進(jìn)口原裝的腎綜合征出血熱ELISA試劑盒，已通過(guò)歐洲CE認(rèn)證，可對(duì)出血熱調(diào)查及血清學(xué)檢測(cè)提供可靠的依據(jù)。
漢坦病毒檢測(cè)試劑盒（美國(guó)FOCUS）
預(yù)期用途
此酶免試劑盒可用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測(cè)。
人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。
前言簡(jiǎn)介
流行性出血熱（EHF）又稱腎病綜合征出血熱（HFRS），是由漢坦病毒（Hantaan type）引起的。與流行性腎病相比（因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染），HFRS的傳染性更嚴(yán)重，一般都會(huì)伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細(xì)胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū)，通過(guò)直接接觸嚙齒動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營(yíng)者都特別容易受到危險(xiǎn)。
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實(shí)驗(yàn)原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測(cè)IgM抗體時(shí)，為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會(huì)結(jié)合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過(guò)氧化酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM抗體檢測(cè)特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標(biāo)儀讀取OD值。
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貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運(yùn)輸和儲(chǔ)存，避免高溫和陽(yáng)光直射，沒(méi)有打開(kāi)的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準(zhǔn)備好的試劑的儲(chǔ)存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。
開(kāi)封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期
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樣品采集和貯存
人血清
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注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項(xiàng)。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測(cè)時(shí)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。此試驗(yàn)要采用人血清樣本 |
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儲(chǔ)存 |
2-8℃ |
≤-20℃ |
避免熱源和太陽(yáng)直射，避免反復(fù)凍溶。 |
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穩(wěn)定性 |
5天 |
12mon |
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試劑盒成分
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規(guī)格 |
符號(hào) |
成分 |
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1 x 12 x 8 |
MTP |
微孔反應(yīng)板 |
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1 x 750 μL |
ANTI IgG CONJ CONC |
酶聯(lián)物（20倍濃縮） |
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1 x 750 μL |
ANTI IgM CONJ CONC |
酶聯(lián)物（20倍濃縮） |
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1 x 1.5 mL |
CONTROL + IgG |
陽(yáng)性質(zhì)控IgG |
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1 x 1.5 mL |
REFCONTROL IgG |
參考對(duì)照質(zhì)控IgG |
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1 x 1.5 mL |
CONTROL + IgM |
陽(yáng)性質(zhì)控IgM |
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1 x 15 mL |
DILBUF CONC |
樣品稀釋緩沖液（20倍濃縮） |
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1 x 1.5 mL |
REFCONTROL IgM |
參考對(duì)照質(zhì)控IgM |
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1 x 1.9 mL |
CONTROL- |
陰性質(zhì)控 |
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1 x 100 mL |
WASHBUF CONC |
洗滌液（10倍濃縮） |
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1 x 1.5 mL |
RE-AB |
類風(fēng)濕因子吸附劑 |
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1 x 12 mL |
TMB SUBS |
TMB底物液 |
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1 x 12 mL |
TMB STOP |
TMB終止液 |
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1 x |
FOIL |
膠粘薄膜 |
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實(shí)驗(yàn)做需器材但試劑盒沒(méi)提供
· 精確微移液管 體積（5; 20; 50; 100; 200; 1000 μL）
· 渦旋混合器
· 保溫箱, 37°C
· 試管（用于樣品稀釋）
· 8道微量移液器
· 洗瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
· 酶標(biāo)儀
· 雙蒸水或去離子水
· 吸水紙,吸嘴,計(jì)時(shí)器
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實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前將試劑盒平衡至室溫（18-25°C）.含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實(shí)驗(yàn)前將其冷卻至至室溫（18-25°C）
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稀釋濃宿成分的準(zhǔn)備（以測(cè)32孔為例）
提示:實(shí)驗(yàn)前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.
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濃縮液 |
組分 |
體積 |
稀釋液 |
比例 |
備注 |
存儲(chǔ) |
穩(wěn)定性 |
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3mL |
DILBUF CONC |
57mL |
去離子水 |
1:20 |
充分混勻 |
2-8°C |
1周 |
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10 mL |
WASHBUF CONC |
90 mL |
去離子水 |
1:10 |
充分混勻 |
2-8°C |
8周 |
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200 μL |
ANTI
IgG CONJ CONC |
3.8 mL |
稀釋洗滌液 |
1:20 |
充分混勻 |
- |
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后倒掉 |
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樣品稀釋
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稀釋 |
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比例 |
備注 |
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穩(wěn)定性 |
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IgG樣品 |
常規(guī) |
稀釋樣品稀釋液 |
1:201 |
10 μL+2000 μL |
2-8°C |
6周 |
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IgM樣品 |
常規(guī) |
稀釋樣品稀釋液 |
1:201 |
10
μL+2000 μL |
2-8°C |
6周 |
提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持?jǐn)?shù)月
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實(shí)驗(yàn)步驟
1將100μl即用型陽(yáng)性質(zhì)控、陰性質(zhì)控、參考對(duì)照質(zhì)控和稀釋血清樣品（如是IgM樣品,需用類風(fēng)濕因子吸附劑前處理）加入到相應(yīng)的微孔中。
2膠粘薄膜蓋板，37℃下溫育45分鐘。
3移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復(fù)洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物（IgG 或IgM）
5膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復(fù)洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時(shí)間間隔。避免產(chǎn)生氣泡。
8每孔中加入100μl TMB底物液
9室溫（18-25°C）溫育10分鐘
10每孔中加入100μl終止液終止底物液反應(yīng)。
1120分鐘內(nèi)于酶標(biāo)儀450nm處讀取OD值。（參考波長(zhǎng)：650nm）
人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。
8、結(jié)果計(jì)算
用病人樣品的OD值比上參考對(duì)照質(zhì)控的OD值計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果
A病人樣品/ A參考對(duì)照質(zhì)控= Q
· IgG抗體：
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Q＜1 |
陰性：沒(méi)有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgG抗體 |
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1≤Q≤1.5 |
可疑灰色區(qū)域，不能明確說(shuō)明結(jié)果，10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢坦病毒，我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下漢灘病毒（Hantaan）IgM抗體或檢測(cè)下普馬拉（Puumala）病毒抗體。 |
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Q＞1.5 |
陽(yáng)性：檢測(cè)到抗?jié)h灘病毒特異性IgG抗體 |
人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。
· IgM抗體：
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Q＜1 |
陰性：沒(méi)有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgM抗體 |
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1≤Q≤2 |
可疑灰色區(qū)域，不能明確說(shuō)明結(jié)果，10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢灘病毒，我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下普馬拉病毒（Puumala）抗體。 |
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Q＞2 |
陽(yáng)性：檢測(cè)到抗?jié)h坦病毒特異性IgM抗體 |
人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測(cè)試劑盒。
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